Дмитрий Владимирович Брусникин родился 17 ноября 1957 года в Потсдаме (ГДР). В школьном возрасте Дмитрию пришлось поменять более десяти средних общеобразовательных школ из-за переездов семьи в связи с частой сменой мест службы отца.
В 1974 году поступил в Московский институт электронной техники в Зеленограде.
В 1975 году сделал свои первые шаги на театральной сцене в народном театре под руководством режиссёра Л. А. Колчановой в Зеленограде.
В 1976 году с двумя молодыми актёрами, окончившими студию при народном театре, отправился в Москву показываться актёру и педагог Виктору Коршунову. Точнее, целью поездки Дмитрия Брусникина было простое сопровождение двух более молодых людей, но Виктор Коршунов попросил прочесть что-либо и Дмитрия. Брусникин прочёл Чехова, после чего Виктор Иванович посоветовал ему поступать в театральный вуз.
В 1977 году Дмитрий взял в институте академический отпуск и устроился работать машинистом сцены в Театре-студии киноактера. Наблюдая за работой на театральной сцене знаменитых киноактёров, Брусникин принял окончательное решение. В 1978 году он подал документы сразу в три театральных вуза Москвы: Щепкинское и Щукинское училища и Школу-студию МХАТ — прошёл конкурс везде, но остановил свой выбор на школе-студии, где курс набирал Олег Ефремов.
Уже начиная со второго курса, Дмитрий был занят в спектаклях МХАТа, идущих на Малой сцене театра, первой его ролью стал Александр Ильич Ульянов в спектакле "Путь" (режиссёры В. Саркисов и А. Васильев).
В 1982 году окончил актёрски факультет Школы-студии при МХАТ имени Горького и был принят в труппу Московского Художественного театра имени Чехова.
Преподавательскую деятельность начал в качестве ассистента в Школе-студии МХАТ сразу после её окончания. С 1993 года является преподавателем дисциплины "Актёрское мастерство".
В 1999, 2003 и 2007 годах набирал курсы в качестве их руководителя вместе со своим однокурсником Романом козаком.
С 1991 года — член Союза театральных деятелей.
С 1999 по 2003 годы — член Учёного совета Школы-студии МХАТ.
В 2006 году Дмитрий Брусникин стал профессором.
8 сентября 2009 года Дмитрию Брусникину присвоено почётное звание "Заслуженный деятель искусств РоссийскойФедерации".
В 2015 году выпускной курс Школы-студии МХАТ, ещё во время учёбы получивший известность как "Мастерская Дмитрия Брусникина", в полном составе был принят в Московский драматический театр "Человек", а сам Дмитрий Брусникин был назначен на должность заместителя художественного руководителя этого театра. В 2017 году "Мастерская Дмитрия Брусникина" в полном составе вошла в труппу московского экспериментального театра "Практика".
3 мая 2018 года Департаментом культуры города Москвы Дмитрий Брусникин назначен художественным руководителем Экспериментального театрального центра новой драмы "Практика".
Умер 9 августа 2018 года.